细 胞 凋 亡 概 念 及 其 特 征

细胞凋亡（Apoptosis）：也称细胞程序性死亡（Programmed Cell Death，PCD），是为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用，属于细胞的“自杀”行为。

细胞凋亡的典型特征：

1）线粒体膜电位的丧失；

2）细胞膜PS（磷脂酰丝氨酸）的外翻；

3）细胞核凝缩和断裂。

凋亡 (apoptosis)

程序性死亡，机体为更好地适应生存环境而采取的一种主动死亡过程。

凋 亡 研 究 热 度 分 析

细胞凋亡与疾病：

凋亡不足凋亡过度肿瘤心血管疾病自身免疫病血液系统疾病病毒感染重症肝炎退行性神经疾病如老年痴呆症帕金森症

细胞凋亡热点问题：

► 细胞接受胞外信号的刺激启动凋亡

► 胞内凋亡特异性蛋白酶（如Caspase）的活化

► 线粒体对凋亡的调控

► Bcl-2蛋白家族对凋亡的调控

凋 亡 分 期

早期事件：Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻

Ø线粒体受损Ø细胞色素C释放中期事件：ØCaspase 3/7/8/9活化晚期事件：ØDNA片段化

早期事件：Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻

Ø线粒体受损Ø细胞色素C释放中期事件：ØCaspase 3/7/8/9活化晚期事件：ØDNA片段化

早期事件：Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻

Ø线粒体受损Ø细胞色素C释放中期事件：ØCaspase 3/7/8/9活化晚期事件：ØDNA片段化

早期事件：Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻

Ø线粒体受损Ø细胞色素C释放中期事件：ØCaspase 3/7/8/9活化晚期事件：ØDNA片段化

早期事件：Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻

Ø线粒体受损Ø细胞色素C释放中期事件：ØCaspase 3/7/8/9活化晚期事件：ØDNA片段化

早期事件：Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻

Ø线粒体受损Ø细胞色素C释放中期事件：ØCaspase 3/7/8/9活化晚期事件：ØDNA片段化

早期事件：

Ø磷脂酰丝氨酸(PS)外翻

Ø线粒体受损

Ø细胞色素C释放

中期事件：

ØCaspase 3/7/8/9活化

晚期事件：

ØDNA片段化

凋亡检测 —— Annexin V

关键技术 9 项

1，接种 对数生长

细胞密度通常不超过1×106/ml，以免引起凋亡

2，收集 上清消化全收

因部分凋亡细胞可能悬浮于培养基中，须先收集上清，离心收集沉淀，再消化收集贴壁细胞，合并上清和消化下来的细胞。

3，消化 Accutase

避免因消化过度使PS外翻，造成假阳性。

用eBioscience的Accutase酶替代胰酶，在多种细胞系中得到验证，对细胞更温和、长时间消化也没有影响。

（对凋亡不明显的实验强烈推荐）

使用细胞消化液－－实际效果比较

4，阳性质控 联科 Multisciences

没有明显的凋亡，该如何调节补偿以及设门？

联科凋亡试剂盒配备阳性质控液，使补偿调节so easy

5, 方案 4管 单双混合

染色：1, Blank、2, Annexin V、3, PI、4, Annexin V+PI

上机：1, Blank、2, 50%Blank +50%Annexin V、3, 50%Blank +50% PI、4, 50%Blank+50%Annexin V+PI、

5, 50%Blank+25%Annexin V+PI+25%Annexin V

6，电压 足够大

大到快要超出边界。

7，细胞数量 足够多

多到细胞全部收集。

8，补偿 横平竖直

3、4象限横平；2、4象限竖直

9，漂亮图片

黄金分割（三分原则）。

关键技术 9 项

1，接种：对数生长

2，收集 ：上清消化全收

3，消化：Accutase

4，阳性质控：联科 Multisciences

5，方案：单双混合

6，电压：足够大

7，细胞数量：足够多

8，补偿 ：横平竖直

9，漂亮图片 ：黄金分割